アプリケーション・データ
≪ PicoGreen® を用いた二本鎖DNA定量 ≫
特 長
サンプル中に混在するRNA,一本鎖DNA、タンパク質等の影響を受けず高感度に定量が可能です。
用 途
このプロトコルはハイスループット・キャピラリーDNAシーケンサーにおけるシークエンス反応用DNAテンプレート(=鋳型)量の測定やDNA増幅法であるPCRのテンプレート量または増幅DNA量の測定などに広く利用されています。
PicoGreen® を用いたDNA定量法は、dsDNAを特異的に測定できますので、DNAシークエンスやPCRにおけるテンプレート量測定に適しています。
また、ハイスループット処理を実現できます。
PicoGreen® を用いたDNA定量法は、dsDNAを特異的に測定できますので、DNAシークエンスやPCRにおけるテンプレート量測定に適しています。
また、ハイスループット処理を実現できます。
検出限界 :250pg/ml
直線範囲 :0.25〜1,000ng/ml
装置構成 :MTP-650FA マイクロプレートリーダ
試 薬 :Molecular Probes社製 PicoGreen® dsDNA quantitation reagent *200-2000 assays*
:濃度既知のDNA溶液 :検量線用
:TE buffer :試薬、サンプル希釈用
分析手順
1.試薬、サンプルの調製
(a) PicoGreen®溶液の調製
・ 原液をTEで200倍に希釈し、必要量(100μl/ウェル)を調製する。
※(注記)希釈後の溶液は、アルミホイル等で遮光する。
(b)検量線用標準DNAの調製
・ 濃度既知のDNA溶液をTEで希釈し、標準DNAを調製。
(c) サンプルDNAの希釈
・ 必要に応じサンプルDNAをTEで希釈。
2.測定
・ 測定用マイクロプレートにPicoGreen®溶液を 100μlずつ分注
・ 標準DNA、サンプルDNAを 100μlずつ添加し、ピペッティングで混和。
・ 室温で5分間インキュべート
・ 蛍光測定
分析条件
測定方式 :エンドポイント測定
フラッシュ回数 :20
MODE1 :蛍光強度
MODE2 :1Ex-1Em
Ex :490nm
Em :530nm
SENS ×ばつ1
測定方向 :縦
TEMP :OFF
測定モード :END
蛍光焦点 :4
データ提供 : (株)日立ハイテクノロジーズ BMC
※(注記)PicoGreen(R) はMolecular Probes, Inc.の登録商標です。
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